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ELISA試劑盒以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在上得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗(yàn)的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。我將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給同行帶來一些啟發(fā)，提高試驗(yàn)質(zhì)量。實(shí)驗(yàn)顯示，ELISA試劑盒經(jīng)過正確處理的熱滅活血清，對大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn)，或*沒有任何作用，甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量，而造成細(xì)胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清，沉淀物...

無論新人還是熟手，細(xì)胞污染都是必須要面對的，那對于細(xì)胞污染，我覺得zui好的措施就是預(yù)防為主，因?yàn)榧?xì)胞一旦污染，想救是非常困難的，即便救活，細(xì)胞狀態(tài)也會差很多。所以我先來說下我是怎么預(yù)防細(xì)胞污染的。生物安全柜是處理細(xì)胞的主要場所，也是細(xì)胞發(fā)生污染的主要場所，所以安全柜的正確使用是預(yù)防細(xì)胞污染的di一步。那么安全柜內(nèi)需要注意的小細(xì)節(jié)有哪些呢？首先，所有進(jìn)入安全柜的東西在進(jìn)入前都要用75%的酒精消毒。特別要注意的是我們的手，只要出了安全柜，再進(jìn)入安全柜前都要噴75%的酒精消毒。實(shí)...

一、肉眼觀察以下幾項(xiàng)：1.細(xì)胞瓶身：如果瓶身上沒有裂縫，正常；如果瓶身上有裂縫，則污染幾率非常大。2.培養(yǎng)基顏色：如果培養(yǎng)基顏色是紅色或者粉色，正常；如果是橙色，則可能是污染或者細(xì)胞過密；如果是黃色，則污染幾率非常大。3.培養(yǎng)基澄清度：如果培養(yǎng)基澄清，正常；如果有少許漂浮物，則可能是污染或者有細(xì)胞凋亡；如果培養(yǎng)基很渾濁，甚至出現(xiàn)絮狀物，則污染幾率非常大。二、進(jìn)行顯微鏡下觀察（通常觀察前需先靜置細(xì)胞1-2h）顯微鏡下可以清晰觀察到細(xì)胞是否有菌類污染，菌類污染通常分為桿菌、球菌和...

干粉培養(yǎng)基是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配制的養(yǎng)料，一般都含有水、氮源、無機(jī)鹽（包括微量元素）、碳源、生長因子（維生素、氨基酸、堿基、抗菌素、色素、激素和血清等）等。干粉培養(yǎng)基由于配制的原料不同，使用要求不同，而貯存保管方面也稍有不同。一般培養(yǎng)基在受熱、吸潮后，易被細(xì)菌污染或分解變質(zhì)，因此一般培養(yǎng)基必須防潮、避光、陰涼處保存。對一些需嚴(yán)格滅菌的培養(yǎng)基（如組織培養(yǎng)基），較長時間的貯存，必須放在3-6℃的冰箱內(nèi)。由于液體培養(yǎng)基不易長期保管，均改制成粉末。干粉培養(yǎng)基若...

根據(jù)賓夕法尼亞大學(xué)佩雷??爾曼醫(yī)學(xué)院的一項(xiàng)新研究，隨著細(xì)胞老化，它們排出有害垃圾的能力下降。研究結(jié)果表明，老年神經(jīng)元中自噬的惡化-從未復(fù)制過的細(xì)胞和它們所居住的尸體一樣古老-可能是一系列神經(jīng)退行性疾病(如肌萎縮側(cè)索硬化癥，阿爾茨海默氏癥)的危險(xiǎn)因素，和帕金森氏癥。使用來自年輕和老年小鼠的神經(jīng)元的活細(xì)胞成像，生理學(xué)教授ErikaHolzbaur博士和作者，Holzbaur實(shí)驗(yàn)室的博士后研究員AndreaStavoe博士本周在eLife上發(fā)表了他們的研究。自噬的重要性在2016年...

酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)由于其易于操作，可以簡單地回答樣本中有多少蛋白質(zhì)/多肽/抗體這一基本問題，是實(shí)驗(yàn)室比較常用的一種檢測方法。而這種簡單的分析方法的核心，就是標(biāo)準(zhǔn)曲線。沒有它，我們的實(shí)驗(yàn)就變成了一個二元的“是/不是”測試。有了它，我們可以深入研究生物反應(yīng)的細(xì)節(jié)。那么，是什么使得標(biāo)準(zhǔn)曲線如此強(qiáng)大呢?讓我們在ELISA的背景來討論這個問題。簡單地說，標(biāo)準(zhǔn)品就是一系列已知目標(biāo)蛋白數(shù)量的陽性對照。例如，如果對人類IgG進(jìn)行ELISA檢測，標(biāo)準(zhǔn)曲線將包含逐漸減少的已知量的人類I...

辛辛苦苦提完RNA，逆轉(zhuǎn)錄后一個個孔加完引物和模板，Z后進(jìn)行RT-PCR，你以為這樣就可以美滋滋地坐等結(jié)果了？等到一幅下面這樣的結(jié)果圖，不知道對于剛接觸RT-PCR的你來說內(nèi)心是否是崩潰的？這是啥？怎么看？別急，讓我慢慢跟你介紹，看完后你就能準(zhǔn)確的分析出你的RT-PCR結(jié)果了。「這里以7500軟件為例進(jìn)行介紹」1.首先設(shè)置好內(nèi)參和對照組「在AnalysisSettings處」，一般我們在上機(jī)前會對應(yīng)設(shè)置好的，如果設(shè)置好的話可以直接跳至第3點(diǎn)。如果沒有設(shè)置好的話是需要重新進(jìn)行設(shè)...

實(shí)驗(yàn)方法原理基本原理類似于DNA的天然復(fù)制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。PCR由變性--退火--延伸三個基本反應(yīng)步驟構(gòu)成：①模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至94℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)做準(zhǔn)備；②模板DNA與引物的退火(復(fù)性)：模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對結(jié)合；③引物的延伸：DNA模板--引物結(jié)合物在Taq酶的...